高产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及鉴定.doc

摘要:本实验主要选用自传统发酵型食品中筛选分离出的乳酸菌菌株。通过对菌株的活化及发酵处理，对发酵液进行纸层析初筛，筛选出产γ-氨基丁酸的菌株，再对初筛出的菌株进行高效液相色谱复筛，得到各菌株产γ-氨基丁酸量的数据。选择GABA产量最高的菌株M9-9在固体平板上对其进行划线纯化处理，最终得到菌株M-6，产量为0.481 g/L。根据《伯杰鉴定手册》对此菌株进行菌株形态学观察和生理生化鉴定实验，初步确定为植物乳杆菌，再进行DNA分子检测，最终确定为植物乳杆菌。

关键词 γ-氨基丁酸；乳酸菌；筛选；鉴定

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 γ-氨基丁酸-1

1.1.1 γ-氨基丁酸的来源-1

1.1.2 γ-氨基丁酸的分布-1

1.2 γ-氨基丁酸的生理作用-2

1.3 乳酸菌的生理功能与重要性-2

1.3.1 乳酸菌的重要性-2

1.3.2 乳酸菌的生理功能-2

1.4 本课题的研究意义和研究内容-3

1.4.1 研究目的及意义-3

1.4.2 研究内容-3

2 材料和方法-5

2.1 实验原料-5

2.1.1实验菌株-5

2.1.2 主要试剂-5

2.1.3 主要仪器-5

2.1.4 试验培养基-6

2.2 研究方法-6

2.2.1 乳酸菌的制备-6

2.2.2 乳酸菌的活化与发酵-7

2.2.3 发酵液的预处理-7

2.2.4 定性分析-纸层析初筛-7

2.2.5 定量分析-高效液相色谱复筛-7

2.2.6 菌株形态学观察-8

2.2.7 菌株生理生化鉴定试验-8

2.2.8 鉴定DNA序列-9

3 实验结果与分析-11

3.1 纸层析初筛结果-11

3.1.1检出限的测定-11

3.1.2产GABA斑点的纸层析图示-11

3.2 高效液相色谱复筛-12

3.2.1 GABA衍生物最大吸收波长和出峰时间的确定-12

3.2.2 GABA标准曲线-13

3.2.3菌株液相定量结果-13

3.3 菌株形态学观察结果-14

3.4 生理生化实验结果-14

3.5 生理生化鉴定总结-18

3.6 16S rDNA测序结果-18

结论-20

致谢-21

参考文献-22