银杏中蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂的活性测定.doc

摘要:本研究首先从底物浓度、酶的用量、酶反应时间、抑制剂溶剂干扰共4个因素对PTP1B抑制剂的高通量快速筛选平台进行优化。其后，利用优化的筛选平台对6种醇提物样品进行初筛，筛选到2种抑制率大于70%的样品分别为银杏醇提物和山药醇提物。接着，将银杏醇提物浓缩液用水溶解后，再次分别用乙酸乙酯、石油醚、正丁醇三种有机物试剂进行萃取。得到乙酸乙酯相、石油醚相、正丁醇相、水相这四种不同极性的提取物，分别测这四种不同极性组分对PTP1B酶的抑制率，筛选出对PTP1B酶活抑制率最大的银杏正丁醇相，再将银杏正丁醇相稀释成不同浓度，根据其对PTP1B酶的抑制率，算出它的IC50值为44.373 µg/mL。

关键词 PTP1B；银杏；抑制剂

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 PTP-1

1.1.1 PTP定义-1

1.1.2 PTP家族-1

1.2 PTP1B抑制剂-1

1.2.1 PTP1B定义-1

1.2.2 PTP1B结构及定位-2

1.2.3 PTP1B与Ⅱ型糖尿病的关系-3

1.2.4 PTP1B抑制剂的相关化合物的研究进展-3

1.3 PTP1B抑制剂临床应用-4

1.3.1 2-草酰胺苯甲酸类-4

1.3.2 苯并呋喃类 （benzbromarone）-5

1.3.3 香草酸类衍生物-5

1.3.4 天然的PTP-1B抑制剂-5

1.4 银杏-5

1.4.1 银杏的概述-5

1.4.2 银杏的营养成分-5

1.4.3 银杏与糖尿病关系-6

1.5 研究目的与意义-6

2 材料与方法-7

2.1 实验材料-7

2.1.1 实验原料-7

2.1.2 实验试剂-7

2.1.3 实验仪器-7

2.2 实验方法-7

2.2.1 银杏醇提与有机试剂萃取-7

2.2.2 对硝基苯酚标准曲线的制作-8

2.2.3 PTP1B活力测定及高通量筛选模型的优化-8

2.2.4 银杏中抑制PTP1B活性部位的筛选-8

2.2.5 抑制率的测定-9

2.2.6 抑制类型的测定-9

3 结果与分析-10

3.1 对硝基苯酚标准曲线-10

3.2 p-NPP浓度曲线-11

3.3 确定酶的最适用量及酶反应平衡时间-12

3.4 DMSO对酶活的影响-13

3.5 钒酸钠不同浓度梯度的抑制率的IC50值-14

3.6 醇提物的筛选-15

3.7 银杏中不同极性部分的提取率-15

3.8 银杏不同极性萃取物的酶的抑制率-15

3.9 银杏正丁醇相不同浓度梯度抑制率的IC50值-16

结论-17

致谢-18

参考文献-19