锁掷酵母发酵产物中红酵母红素的纯化、鉴定及体外抗氧化性质研究.doc

摘 要:类胡萝卜素因为其广泛的生理功能和难以替代的食用、药用价值，被认为是最具发展潜力的天然色素类食品添加剂之一。本实验室前期研究发现锁掷酵母(Sporidiobolus pararoseus)菌株的发酵产物中含有 β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、圆酵母素(torulene)、红酵母红素(torularhodin)等多种类胡萝卜素。其中红酵母红素与番茄红素化学结构相似，可能具有抗氧化、抗癌等多种生物活性，但目前尚未见到国内外相关报道研究。因此，本研究首先采用有机溶剂提取得到色素混合溶液，后利用硅胶柱分离纯化红酵母红素。纯化采用不同比列的石油醚丙酮混合洗脱。纯化的色素再通过薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)、全紫外扫描（DAD）及质谱分析(LC-ESI-MS)对其纯度及种类进行鉴定；而后，采用红外(FT-IR)和拉曼（Raman）鉴定其结构；最后进行DDPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基清除体系进行纯化色素抗氧化性的评价。通过以上研究得到以下结果：

(1) 锁掷酵母发酵产物中的红酵母红素通过硅胶柱层析可以得到有效分离，根据TLC及HPLC结果判定所得色素的纯度大于98%；

(2) DAD、LC-ESI-MS结果表明，所得到的色素性质与文献报道的红酵母红素结果一致，FT-IR及Raman光谱结果对其结构进行了很好表征；

(3) DPPH•自由基清除体系和亚油酸抗氧化体系结果表明：β-胡萝卜素在浓度为8.72×10-6 mol/L时对DPPH•自由基的清除作用为3.78%。番茄红素在8.17×10- 6mol/L时DPPH•自由基的清除率已达到68.96%，而红酵母红素在浓度为4.85×10- 6 mol/L时DPPH•自由基的清除率已达到了68.29%。表明红酵母红素的抗氧化活性优于番茄红素，均强于β-胡萝卜素。综上所述，红酵母红素可作为一种新型抗氧化剂进行研究，其在抗氧化、抑癌等方面的研究前景相当可观。

关键词：锁掷酵母；红酵母红素；纯化；鉴定；抗氧化活性

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1类胡萝卜素简介-1

1.2发酵生产类胡萝卜的研究-1

1.3类胡萝卜素的结构和性质-1

1.4红酵母红素的研究背景-3

1.5课题研究目的和意义-4

1.6 课题主要研究内容-4

第2章 实验材料与方法-5

2.1 材料与设备-5

2.1.1锁掷酵母发酵液来源-5

2.1.2主要试剂-5

2.1.3 主要仪器-5

2.2 实验方法-5

2.2.1红酵母红素提取-5

2.2.2红酵母红素的分离-6

2.2.3红酵母红素的纯化-6

2.2.4红酵母红素的纯度鉴定-6

2.2.5红酵母红素的结构鉴定-6

2.2.6红酵母红素抗氧化实验-6

第3章 实验结果与讨论-9

3.1 红酵母红素的纯化、鉴定-9

3.1.1 红酵母红素的薄层层析-9

3.1.2 红酵母红素的HPLC结果-10

3.1.3 红酵母红素的DAD结果-11

3.1.4 红酵母红素的液质连用结果-12

3.1.5 红酵母红素的红外结果-12

3.1.6红酵母红素的拉曼结果-13

3.2 红酵母红素的抗氧化活性-14

3.2.1 红酵母红素的对DPPH•自由基的清除活性-15

第4章 结论与展望-17

4.1 结论-17

4.2 不足之处及未来展望-17

参考文献-18

致谢-20