牛磺酸对HepG2细胞内胆固醇浓度的影响.doc

摘要:目的：验证牛磺酸对高胆固醇HepG2细胞模型中的降胆固醇作用。方法：HepG2体外培养，利用MTT方法检测牛磺酸对细胞增殖状态的影响，从而筛选出牛磺酸浓度；利用氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）和50%胎牛血清诱导高胆固醇模型；在此模型基础上，加入不同浓度牛磺酸，经油红O染色初步确认细胞内脂质含量的影响，并初步建立细胞内胆固醇检测方法。结果：根据MTT实验，得到牛磺酸降低胆固醇的无毒作用浓度范围在（0~30）mM，并且随着牛磺酸浓度的增加HepG2细胞增殖状态明显下降；在显微镜下可以看到建模的细胞脂质含量变化，并且建模的细胞内红色脂粒较正常细胞内数量多，体积大，说明氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）成功建立高脂模型；油红O染色，细胞内红色脂粒随着牛磺酸浓度的增加而减少；检测到正常细胞内平均相对总胆固醇的含量为1.91（µg/ml）。结论：结合本实验的结果，我们可以判断牛磺酸可以影响细胞的增值率，并且通过统计学分析，可以得到牛磺酸在其浓度小于30mM时，对细胞没有明显毒性作用；初步判断牛磺酸具有降脂作用；并且初步确定了细胞内胆固醇含量测定的方法。为之后的研究者继续深入探讨牛磺酸的降脂作用奠定了基础。

关键词：牛磺酸、胆固醇、HepG2、高脂模型

目录

摘要

Abstract

引言

1.2缓解高胆固醇血症的一种活性物质——牛磺酸-5

1.2.1牛磺酸的简介-5

1.2.2牛磺酸的生理活性-5

1.3牛磺酸降低血脂中的胆固醇-5

2 材料与方法-6

2.1 实验材料-6

2.1.1 实验试剂-6

2.1.2 实验耗材-6

2.1.3实验仪器-7

2.2 实验方法-7

2.2.1 HepG2细胞的培养-7

2.2.1.1 HepG2细胞的复苏及培养-7

2.2.1.2 HepG2细胞高胆固醇模型的建立-8

2.2.2 牛磺酸无毒实验浓度筛选（MTT法）-8

2.2.3 牛磺酸降低胆固醇实验-8

2.2.3.1油红O染色-9

2.2.3.2细胞内胆固醇浓度测定-9

3 结果与分析-11

3.1结果-11

3.1.1牛磺酸无毒浓度筛选的结果-11

3.1.2高胆固醇模型建立的结果-11

3.1.3油红O染色结果-12

3.1.4 细胞内总胆固醇含量的测定-13

3.1.4.1胆固醇标准曲线-13

3.1.4.2蛋白标准曲线-14

3.2 分析-15

结论

参考文献

致谢