乙醛脱氢酶pH稳定剂的筛选.doc

摘要:本试验将醋醅中分离筛选得到的高产醋酸杆菌作为菌株，对乙醛脱氢酶粗酶液的pH稳定性做了一定的研究，结果表明乙醛脱氢酶在pH5.0～6.0酶稳定性较好，相对酶活保持在80%以上，其它pH下酶活较低。通过对pH稳定剂的筛选研究，发现特定浓度下的硫酸锰、氯化钙、赖氨酸对ALDH的pH稳定性具有一定的稳定作用，氯化钾、丙氨酸、甘氨酸、硫酸铵对ALDH稳定性作用明显，而Cu2+、Zn2+无稳定作用。通过正交实验，获得最优pH稳定剂组合：氯化钾2 mmol/L、甘氨酸20 mmol/L、丙氨酸15 mmol/L、硫酸铵15 mmol/L。酶液中加入组合试剂后，在不同pH下ALDH的酶活能够提高到116%～166%，在pH为6.0左右时，稳定剂的稳定性最好，能够将酶活提高166%。

关键词  醋酸杆菌；乙醛脱氢酶；pH稳定剂

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 食醋的概述-1

1.2 食醋发酵工艺-1

1.3 醋酸菌的概述-1

1.4 乙醛脱氢酶的简介-1

1.5乙醛脱氢酶的来源-1

1.6乙醛脱氢酶与相关疾病-2

1.6.1 ALDH与酒精中毒-2

1.6.2 ALDH与肝损伤-2

1.6.3 ALDH与心血管疾病-2

1.7 乙醛脱氢酶的发展前景-3

1.8 酶的pH稳定性-3

1.9本文研究的意义和内容-3

1.9.1 本文研究的意义-3

1.9.2 本文研究的内容-4

2 材料与方法-5

2.1试验材料-5

2.1.1菌种-5

2.1.2培养基-5

2.1.3主要仪器-5

2.1.4主要试剂-5

2.2试验方法-7

2.2.1醋酸杆菌的斜面活化与摇瓶发酵-7

2.2.2 发酵液中乙醛脱氢酶粗酶液的提取与酶活鉴定-7

2.2.3酶的pH稳定性研究-8

2.2.4不同物质对乙醛脱氢酶酶活的稳定性影响-8

3结果与分析-10

3.1 酶的pH稳定曲线-10

3.2酶的pH稳定剂筛选-10

3.2.1酶的pH稳定剂初筛-10

3.2.2酶的pH稳定剂复筛-12

3.3正交确定最佳稳定剂组合-16

3.3.1正交试验-16

3.3.2 验证试验-17

3.3.3 对比试验-17

结论-18

致谢-19

参考文献-20