固定化灵芝细胞产胞外三萜工艺研究.doc

摘要:采用氯化钙、海藻酸钠对灵芝细胞进行固定，研究包埋法固定灵芝细胞的工艺条件，探讨固定化培养条件对灵芝胞外三萜类产量影响，用香草醛-高氯酸比色法测定三萜类含量。固定灵芝细胞的最佳工艺条件为，当海藻酸钠浓度为5.0%、氯化钙浓度2.1%时，菌胶比为2:1；固定灵芝细胞的最佳培养条件为，培养温度27℃三萜类产量10.972μg/mL，pH值为5.5时三萜类产量11.458μg/mL，培养时间12d，三萜类产量为14.063μg/mL，冷藏时间1d，三萜类产量13.854μg/mL，接种50个固定化小球可回收利用六次。

关键词 灵芝；固定化；三萜；海藻酸钠；氯化钙

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 灵芝的概况-1

1.2 灵芝的化学成分-1

1.2.1 三萜类的结构与功能-1

1.2.2 灵芝三萜类的提取方法-3

1.2.3 灵芝三萜类的检测方法-4

1.3 固定化细胞技术-4

1.4 固定化细胞方法-4

1.4.1 吸附法-5

1.4.2 交联法-5

1.4.3 共价结合法-5

1.4.4 包埋法-5

1.5 包埋法材料的选择及影响因素-5

1.5.1 材料的选择-5

1.5.2 影响固定化细胞的因素-6

1.6 固定化细胞技术的前景与问题-6

1.7 本课题研究的意义-6

2 材料与方法-7

2.1实验试剂与仪器-7

2.1.1实验试剂-7

2.1.2实验仪器-8

2.2 实验方法-8

2.2.1 实验材料-8

2.2.2 灵芝菌种的活化与培养-8

2.3 固定化灵芝细胞的制备-9

2.4 标准曲线的制作-9

2.5 灵芝固定化工艺-9

2.5.1 探索最佳海藻酸钠浓度的操作过程-9

2.5.2 探索最佳氯化钙浓度的操作过程-9

2.5.3 探索最佳菌胶比的操作过程-10

2.6 灵芝固定化培养-10

2.6.1 探索最佳培养温度的操作过程-10

2.6.2 探索培养基最佳pH的操作过程-10

2.6.3 探索最佳培养时间的操作过程-10

2.6.4 探索重复利用次数（稳定性）的操作过程-11

2.6.5 探索冷藏时间的操作过程-11

2.7 比色法测定三萜类含量-11

3 结果与讨论-13

3.1 标准曲线的制作-13

3.2 固定化最佳条件的选择-13

3.2.1 海藻酸钠的浓度对固定化条件的影响-13

3.2.2 氯化钙的浓度对固定化条件的影响-15

3.2.3 菌胶比对固定化灵芝细胞胞外三萜产量影响-16

3.3 固定化培养基条件的选择-17

3.3.1 温度对固定化灵芝细胞胞外三萜产量的影响-17

3.3.2 培养基pH值对固定化灵芝细胞胞外三萜产量的影响-18

3.3.3 培养时间对固定化灵芝细胞胞外三萜产量的影响-19

3.3.4 冷藏时间对固定化灵芝胞外产三萜产量的影响-20

3.3.5 固定化小球回收次数与固定化灵芝细胞胞外三萜产量-21

结论-23

致谢-24

参考文献-25

附录-27